BD TB Dažymo Rinkiniai ir Reagentai

Transkriptas

1 ! TB Dažymo Rinkiniai ir Reagentai "# /05 Lietuviškai Simbolių paaiškinimai nurodyti instrukcijų pabaigoje. TB Stain Kit K TB Carbolfuchsin KF TB Decolorizer TB Brilliant Green K Mikobakterijų dažymui Kinyoun (šalto) rūgštimi neišplaunamo dažo x 250 ml x 250 ml x 250 ml Kat. nr TB Stain Kit ZN TB Carbolfuchsin ZN TB Decolorizer TB Methylene Blue Mikobakterijų dažymui Ziehl-Neelsen (karšto) rūgštimi neišplaunamo dažo x 250 ml x 250 ml x 250 ml TB Quick Stain Kit TB Quick Stain Carbolfuchsin TB Quick Stain Methylene Blue Greitesnė mikobakterijų dažymo šaltu rūgštimis neišplaunamo dažo versija x 250 ml x 250 ml 2235 TB Fluorescent Stain Kit M TB Auramine M TB Decolorizer TM TB Potassium Permanganate Mikobakterijų dažymui Morse, Blair, Weiser ir Sproat fluorescenciniu x 250 ml x 250 ml x 250 ml 2259 TB Fluorescent Stain Kit T TB Auramine-Rhodamine T TB Decolorizer TM TB Potassium Permanganate Mikobakterijų dažymui Truant, Brett ir Thomas fluorescenciniu x 250 ml x 250 ml x 250 ml 2252 TB Auramine M TB Auramine-Rhodamine T TB Brilliant Green K TB Carbolfuchsin KF TB Carbolfuchsin ZN TB Decolorizer TB Decolorizer TM TB Methylene Blue TB Potassium Permanganate TB Quick Stain Carbolfuchsin Mikobakterijų dažymui Morse, Blair, Weiser ir Sproat fluorescenciniu Mikobakterijų dažymui Truant, Brett ir Thomas fluorescenciniu Mikobakterijų dažymui Kinyoun (šalto) ir Ziehl- Neelsen (karšto) rūgštimi neišplaunamo dažo Mikobakterijų dažymui Kinyoun (šalto) rūgštimi neišplaunamo dažo Mikobakterijų dažymui Ziehl-Neelsen (karšto) rūgštimi neišplaunamo dažo Mikobakterijų dažymui Kinyoun (šalto) ir Ziehl- Neelsen (karšto) rūgštimi neišplaunamo dažo Mikobakterijų dažymui Truant, Brett ir Thomas bei Morse, Blair, Weiser ir Sproat fluorescenciniu Mikobakterijų dažymui Kinyoun (šalto) ir Ziehl- Neelsen (karšto) rūgštimi neišplaunamo dažo Mikobakterijų dažymui Truant, Brett ir Thomas bei Morse, Blair, Weiser ir Sproat fluorescenciniu Greitesnė mikobakterijų dažymo šaltu rūgštimis neišplaunamo dažo versija 4 x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml x 250 ml 2236 TB Quick Stain Methylene Blue Greitesnė mikobakterijų dažymo šaltu rūgštimis neišplaunamo dažo versija 3 x 250 ml 2237

2 NAUDOJIMO PASKIRTIS TB Dažymo Rinkiniai yra naudojami tepinėlių, paruoštų iš mėginių ir kultūrų, įtariamų turint mikobakterijų, dažymui norint preliminariai diagnozuoti mikobakterijų sukeltą infekciją ir apibūdinti bakterinius izoliatus. SANTRAUKA IR PAAIŠKINIMAS Mikroskopinis dažymo metodas yra vienas seniausių metodų, leidžiančių nustatyti tuberkuliozės bacilas. Šis metodas ir šiandien taikomas kaip standartinis metodas. Kadangi mikobakterijos pasižymi unikalia rūgštimis neišplaunamo dažo savybe, šis dažymo metodas leidžia anksti nustatyti preliminarią diagnozę bei suteikia informacijos apie rūgštimis neišplaunamo dažo savybe pasižyminčių bacilų skaičių. Fluorescencinė mikroskopija yra gerokai pranašesnė už klasikinį mikobakterijų nustatymo metodą, nes fluorescencinis metodas yra daug greitesnis ir paprastesnis, stiklelius analizuoti daug lengviau, o gauti rezultatai yra patikimesni. 2 TB Dažymo Rinkinyje K (TB Stain Kit K) taikoma Kinyoun (šalto) rūgštimis neišplaunamo dažo procedūra. 3 TB Dažymo Rinkinyje ZN (TB Stain Kit ZN) taikoma Ziehl-Nielsen (karšto) rūgštimis neišplaunamo dažo procedūra. 4 TB Greito Dažymo Rinkinys (TB Quick Stain Kit) yra greitesnė šalto dažymo metodo versija. TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinyje M (TB Fluorescent Stain Kit M) taikoma auramino O rūgštimis neišplaunamo dažo fluorescencinė procedūra. 5 TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinyje T (TB Fluorescent Stain Kit T) taikoma auramino-rodamino rūgštimis neišplaunamo dažo fluorescencinė procedūra, aprašyta Truant, Brett ir Thomas. 6 PROCEDŪROS PRINCIPAI Pagrindinė mikobakterijų savybė yra ta, kad jos yra rūgštims-atsparios, t.y. nudažius anilino dažu, baziniu fuksinu, dažo iš jų neįmanoma išplauti, todėl jos išlaiko raudoną spalvą net jei yra veikiamos rūgšties ir alkoholio mišiniu. Ziehl-Neelsen dažas, metileno mėlynasis, yra kontrastinis dažas. Kinyoun dažymui naudojama briliantinė žaluma suteikia reikiamą kontrastą. TB Greito Dažymo Rinkinyje kontrastiniu dažu naudojamas metileno mėlynasis, tačiau šiame dažymo metode atskira atplovimo procedūra yra nereikalinga, kadangi atplovėjo/kontrastinio dažo Reagentas B tepinėlį vienu metu ir atplauna, ir nudažo kontrastiniu dažu. Fluorescenciniai dažai pasižymi savybe skleisti matomos šviesos spindulius, sužadinus dažus trumpesnio bangos ilgio ultravioletine šviesa, t.y. gyvsidabrio garų lempa ar stipria, mėlyna per atitinkamus filtrus praleidžiama šviesa. 7 Auraminas O ir rodaminas B jungiasi su mikobakterijų ląstelės sienelėse esančiomis mikolinėmis rūgštimis. 8 Nesusijungęs dažas pašalinamas rūgšties-alkoholio atplovėjo tirpale. Kalio permanganatas naudojamas kaip kontrastinis dažas, kuris slopina nespecifinę foninę fluorescenciją. 2

3 REAGENTAI Apytikrė sudėtis* viename litre. TB Dažymo Rinkinys K (TB Stain Kit K) TB karbolfuksinas KF (TB Carbolfuchsin KF) Bazinis fuksinas...5,0 g Fenolis, USP...45,0 g Izopropanolis...200,0 ml Etanolis...50,0 ml Distiliuotas vanduo...750,0 ml TB atplovėjas (TB Decolorizer) Druskos rūgštis...30,0 ml Etanolis/metanolis...970,0 ml TB briliantinė žaluma K (TB Brilliant Green K) Briliantinė žaluma...2,0 g Natrio hidroksidas...0,02 g Distiliuotas vanduo...000,0 ml TB Dažymo Rinkinys ZN (TB Stain Kit ZN) TB karbolfuksinas ZN (TB Carbolfuchsin ZN) Bazinis fuksinas...,7 g Fenolis, USP...50,0 g Izopropanolis...95,0 ml Distiliuotas vanduo...905,0 ml TB atplovėjas (TB Decolorizer) Druskos rūgštis...30,0 ml Etanolis/metanolis...970,0 ml TB metileno mėlynasis (TB Methylene Blue) Metileno mėlynasis, USP...2,4 g Etanolis/metanolis...300,0 ml Distiliuotas vanduo...700,0 ml TB Greito Dažymo Reagentai (TB Quick Stain Reagents) Karbolfuksino reagentas A (Carbolfuchsin Reagent A) Bazinis fuksinas...7,0 g Vandeninis Fenolis...000,0 g Metileno mėlynojo reagentas B (Methylene Blue Reagent B) Metileno mėlynasis (alkoholinis)...2,0 g Rūgštinis alkoholis...000,0 g TB Fluorescencinio dažymo Rinkinys M (TB Fluorescent Stain Kit M) TB Auraminas M (TB Auramine M) Auraminas O... 2,0 g Fenolis, USP... 4,0 g Glicerinas, USP... 00,0 ml Izopropanolis...250,0 ml Distiliuotas vanduo ,0 ml TB atplovėjas TM (TB Decolorizer TM) Druskos rūgštis... 5,0 ml Izopropanolis...700,0 ml Distiliuotas vanduo...300,0 ml TB kalio permanganatas (TB Potassium Permanganate) Kalio permanganatas... 5,0 g Distiliuotas vanduo...000,0 ml TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys T (TB Fluorescent Stain Kit T) TB auraminas-rodaminas T (TB Auramine- Rhodamine T) Auraminas O...2,0 g Rodaminas B...6,0 g Fenolis, USP...80,0 g Glicerinas, USP...600,0 ml Izopropanolis...40,0 ml Distiliuotas vanduo...260,0 ml TB atplovėjas TM (TB Decolorizer TM) Druskos rūgštis...5,0 ml Izopropanolis...700,0 ml Distiliuotas vanduo...300,0 ml TB kalio permanganatas (TB Potassium Permanganate) Kalio permanganatas...5,0 g Distiliuotas vanduo...000,0 ml *Pakoreguota ir/arba papildyta atsižvelgiant į veikimo charakteristikas. Atsargumo priemonės: In vitro diagnostikai. Mėginiuose gali būti patogeninių mikroorganizmų, įskaitant hepatito virusus ir žmogaus imunodeficito virusą. Dirbant su krauju ar kitais kūno skysčiais užterštomis priemonėmis, būtina laikytis Standartinių atsargumo priemonių 9-2 ir įstaigoje priimtų taisyklių. Dirbant aerozolių nesudarančiomis sąlygomis, kaip pvz., ruošiant rūgštimi neišplaunamo dažymo tepinėlius, įrangai ir patalpoms taikomos Biologinės saugos lygio 2 taisyklės ir procedūros. Visas procedūras, kurių metu susidaro aerozoliai, reikia atlikti Klasės I ar II biologiškai saugiame laminare. 3

4 Jei laboratorijose auginamos ir naudojamos M. tuberculosis ir M. bovis kultūros, įrangai ir patalpoms taikomos Biologinės saugos lygio 3 taisyklės ir procedūros. Gyvūnų tyrimams taip pat reikalaujama specialių procedūrų. 3 Šie reagentai yra kenksmingi arba mirtini, jei nuryjami. Gali sudirginti akis arba apakinti. Jei pateko į akis, mažiausiai 5 minučių akis reikia plauti tekančiu čiaupo vandeniu ir kreiptis pagalbos į medikus. Dažų tirpalai ir atplovėjai yra labai degūs, o jų garai gali būti kenksmingi, todėl jų negalima naudoti greta atviros liepsnos. Stenkitės, kad reagentai nepatektų ant odos, į akis ar ant gleivinių. Visus reagentus naudokite gerai vėdinamose patalpose, stenkitės ilgai nekvėpuoti susidariusiais garais, saugokite odą nuo sąlyčio ir nenurykite. TB karbolfuksinas ZN: Toksiškas, jei patenka ant odos ar nuryjamas. Gali nudeginti. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Stenkitės, kad nepatektų ant odos ir į akis. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius. TB atplovėjas TM: Gali nudeginti. Konteineris turi būti gerai uždarytas ir laikomas gerai vėdinamoje patalpoje. Jei pateko į akis, nedelsiant plaukite dideliu kiekiu vandens ir kreipkitės pagalbos į medikus. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius, mūvėkite apsaugines pirštines ir naudokite akių/veido apsaugą. Nelaimingo atsitikimo atveju arba pasijutus blogai, nedelsiant kreipkitės į medikus. TB kalio permanganatas: Dirgina akis, kvėpavimo sistemą ir odą. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Stenkitės, kad nepatektų ant odos ir į akis. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius. TB auraminas M: Degus. Dirgina akis, kvėpavimo sistemą ir odą. Jei pateko ant odos, paveiktą vietą nedelsiant plaukite dideliu kiekiu vandens. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Laikykite atokiai nuo degimo šaltinių. Nerūkykite. Stenkitės, kad nepatektų ant odos ir į akis. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius. TB auraminas-rodaminas T: Degus. Toksiškas, jei patenka ant odos ar nuryjamas. Gali nudeginti. Galimas negrįžtamų poveikių pavojus. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Jei pateko į akis, nedelsiant plaukite dideliu kiekiu vandens ir kreipkitės pagalbos į medikus. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius, mūvėkite apsaugines pirštines ir naudokite akių/veido apsaugą. Nelaimingo atsitikimo atveju arba pasijutus blogai, nedelsiant kreipkitės į medikus. TB atplovėjas: Kenksmingas įkvėpus arba nurijus. Konteineris turi būti gerai uždarytas ir laikomas gerai vėdinamoje patalpoje. Laikykite atokiai nuo degimo šaltinių. Nerūkykite. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius. TM metileno mėlynasis: Kenksmingas įkvėpus arba nurijus. Dirgina akis, kvėpavimo sistemą ir odą. Galimas negrįžtamų poveikių pavojus. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Laikykite atokiai nuo degimo šaltinių. Nerūkykite. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius, mūvėkite pirštines. TB karbolfuksinas KF: Kenksmingas, jei pateko ant odos arba nurijus. Dirgina akis ir odą. Galimas negrįžtamų poveikių pavojus. Konteineris turi būti sandariai uždarytas. Laikykite atokiai nuo degimo šaltinių. Nerūkykite. Jei pateko į akis, nedelsiant plaukite dideliu kiekiu vandens ir kreipkitės pagalbos į medikus. Vilkėkite tinkamus apsauginius drabužius, mūvėkite pirštines. Laikymo sąlygos: TB Dažymo rinkinius ir Reagentus laikykite 5 30 C. Iš pakuotės išimtus reagentus reikia laikyti tamsoje. Galiojimo data taikoma gaminiams, kurie laikomi originaliuose konteineriuose nurodytose sąlygose. MĖGINIŲ PAĖMIMAS IR PARUOŠIMAS Mėginį plonu sluoksniu tiesiogiai paskleiskite ant švaraus mikroskopinio stiklelio. Tepinėlius galima ruošti iš skreplių (tiesiogiai paskleidžiant mėginį arba naudojant koncentruotus skreplius), nugaros ir kitų kūno skysčių (šlapimas iš kateterio), homogenizuotų audinių; taip pat tepinėlius galima ruošti atspaudų. 4

5 Išdžiovinkite tepinėlį. Fiksuokite tepinėlį, stiklelį 2 3 kartus perbraukus per nedidelę liepsną. Neperkaitinkite. Arba naudokite elektrinį kaitinimo prietaisą (65 75 C), kuriame palaikykite tepinėlius mažiausiai 2 valandas. 4 PROCEDŪRA Tiekiamos priemonės*: TB Dažymo Rinkinys K, TB Dažymo Rinkinys ZN, TB Greito Dažymo Rinkinys, TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys M, TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys T. *Reagentus galima užsisakyti atskirai. Reikalingos netiekiamos priemonės: Mikroskopiniai stikleliai nauji arba išplauti rūgšties dichromato tirpale, dažymo loveliai ir mikroskopas su imersiniais lęšiais arba fluorescencinis mikroskopas. Tyrimo procedūra KINYOUN DAŽYMAS TB Dažymo Rinkinys K. Padėkite stiklelius į dažymo lovelį ir užpilkite TB karbolfuksinu KF, palaikykite 4 minutes. Nekaitinkite. 2. Atsargiai nuplaukite po tenkančiu vandeniu. 3. Plaukite su TB atplovėju 3 5 sekundžių. 4. Atsargiai nuplaukite po tenkančiu vandeniu. 5. Dažykite kontrastiniais dažais TB briliantine žaluma K arba TB metileno mėlynuoju (galima įsigyti atskirai) 30 sekundžių. 6. Atsargiai nuplaukite po tekančiu vandeniu. 7. Išdžiovinkite ore. Jei naudojote TB metileno mėlynąjį, išdžiovinkite kaitindami nedidelėje temperatūroje. ZIEHL-NEELSEN DAŽYMAS TB Dažymo Rinkinys ZN. Padėkite stiklelius į dažymo lovelį ir užpilkite TB karbolfuksinu ZN. Pakaitinkite, kad pradėtų garuoti ir garinkite 5 minutes. 2. Atsargiai nuplaukite po tenkančiu vandeniu. 3. Plaukite su TB atplovėju 2 minutes, du kartus pakeisdami reagentą, kol plovimo tirpale nebesimatys raudonų dažų. 4. Atsargiai nuplaukite po tenkančiu vandeniu. 5. Dažykite kontrastiniais dažais TB briliantine žaluma K arba TB metileno mėlynuoju 30 sekundžių. 6. Atsargiai nuplaukite po tenkančiu vandeniu. 7. Išdžiovinkite kaitindami nedidelėje temperatūroje. TB GREITAS DAŽYMAS TB Greito Dažymo Rinkinys. Padėkite stiklelius į dažymo lovelį ir užpilkite TB Greito Dažymo karbolfuksino reagentu A. Palaikykite 5 minutes. 2. Atsargiai plaukite po tenkančiu vandeniu, kol dažas pilnai nusiplaus. 3. Dažykite kontrastiniu dažu metileno mėlynojo reagentu B, palaikykite 2 ½ 3 minutes. 4. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu, išdžiovinkite ore. 5

6 MORS DAŽYMAS TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys M. Padėkite stiklelius į dažymo lovelį ir užpilkite TB auraminu M. Palaikykite 5 minučių. 2. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 3. Plaukite su TB atplovėju TM sekundžių. 4. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 5. Dažykite kontrastiniu dažu TB kalio permanganatu 2 minutes. 6. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 7. Išdžiovinkite ore. 8. Analizuokite mikroskopu su filtrais, kaip nurodyta Chapin ir Murray. 5 TRUANT DAŽYMAS TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys T. Padėkite stiklelius į dažymo lovelį ir užpilkite TB auraminu-rodaminu T (kuris prieš naudojimą buvo gerai sumaišytas). Palaikykite nejudindami minutes kambario temperatūroje. 2. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 3. Plaukite su TB atplovėju TM 2 3 minutes. 4. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 5. Dažykite kontrastiniu dažu TB kalio permanganatu 4 5 minutes. 6. Atsargiai plaukite po tekančiu vandeniu. 7. Atsargiai nusausinkite. Išdžiovinkite ore arba kaitindami nedidelėje temperatūroje. 8. Analizuokite mikroskopu su filtrais, kaip nurodyta Truant et al., 6 arba Chapin ir Murray. 5 Kokybės kontrolė: Rekomenduojama kiekvieną dieną analizuoti kontroles (BBL AFB stiklelis, katalogo nr. 2339) arba žinomus rūgštimi neišplaunamo dažo mikroorganizmus ar rūgštimi išplaunamo dažo mikroorganizmus. Kokybės kontrolės reikalavimai turi atitikti taikomus vietinius, šalies ir/arba federalinius nuostatus ar akreditacijos reikalavimus bei jūsų laboratorijos Kokybės Kontrolės procedūras. Rekomenduojama laikytis atitinkamų CLSI (anksčiau NCCLS) nuorodų ir CLIA reikalavimų dėl atitinkamų Kokybės Kontrolės procedūrų. Organizmas Mycobacterium tuberculosis H37Ra ATCC 2577 Bacillus subtilis ATCC 6633 Laukiami rezultatai Teigiami Neigiami PROCEDŪROS APRIBOJIMAI Teigiama dažymo reakcija yra preliminarus požymis, rodantis, kad mėginyje yra mikobakterijų. Neigiama dažymo reakcija nebūtinai rodo, kad mėginys yra neigiamas ir nebus galima iš šio mėginio išauginti mikobakterijų kultūros. Norint identifikuoti mikobakterijas, būtina taikyti kitus s (kultūros, molekulinis ir kt.). LAUKIAMI REZULTATAI IR TYRIMO CHARAKTERISTIKOS -8,5 TB Dažymo Rinkinys K TB Dažymo Rinkinys ZN TB Greito Dažymo Rinkinys TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys M TB Fluorescencinio Dažymo Rinkinys T Rūgštimi neišplaunamo dažo bacilos Nuo tamsiai raudonos iki rožinės Nuo tamsiai rožinės iki raudonos Nuo tamsiai raudonos iki rožinės Rūgštimi išplaunamo dažo bacilos Žalia Mėlyna Nuo mėlynos iki mėlynai žalios Mikobakterijos Šviesiai geltona-žalia fluorescencija Rausvai oranžinė fluorescencija 6

7 NAUDOTA LITERATŪRA. Nolte, F.S. and B. Metchock Mycobacterium, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Tenover, F.C., J.T. Crawford, R.E. Huebner, L.J. Geiter, C.R. Horsburgh, Jr., and R.C. Good The resurgence of turberculosis: is your laboratory ready? J. Clin. Microbiol. 3: Ebersole, L.L Acid-fast stain procedures, p In H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol.. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Murray, R.G.E., R.N. Doetsch and C.F. Robinow Determinative and cytological light microscopy, p In P. Gerhardt, R.G.E. Murray, W.A. Wood and N.R. Krieg (ed.), Methods for general and molecular bacteriology, American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Heifets, L.B. and R.C. Good Current laboratory methods for the diagnosis of tuberculosis, p In B.R. Bloom (ed.), Tuberculosis: pathogenesis, protection, and control, American Society for Microbiologhy, Washington, D.C. 6. Truant, J.P., W.A. Brett and W. Thomas, Jr Fluorescence microscopy of tubercle bacilli stained with auramine and rhodamine. Henry Ford Hosp. Med. Bull. 0: Cernoch, P.L., R.K. Enns, M.A. Saubolle and R.J. Wallace, Jr Cumitech 6A, Laboratory diagnosis of the mycobacterioses. Coord. ed. A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Baron, E.J. and S.M. Finegold Bailey & Scott s diagnostic microbiology, 8th ed. The C.V. Mosby Company, Baltimore, MD. 9. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 0. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 7: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 2. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 8 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 6() of Directive 89/39/EEC). Official Journal L262, 7/0/2000, p U.S. Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, and National Institutes of Health Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 4th ed. HHS Publication No. (CDC) U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Kent, P.T. and G.P. Kubica, 985. Public Health Mycobacteriology. A guide for the level III laboratory, p. 58, U.S. Dept. of Health and Human Services, Centers for Disease Control, Atlanta Ga. 5. Chapin, K.C. and P.R. Murray Stains, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7

8 # #$ Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland 252 USA % BENEX Limited Bay K a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and BBL are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD. 8