DUO LYME IgG+IgM-CHECK-1 Ref Greitas imunochormatografinis testas anti- Borrelia IgG & IgM antikūniams (antikūnams) plazmoje, serume arba kapil

Transkriptas

1 I. PRINCIP AS Laimo liga (1) ar borelio zė sukelia spiroc he te- Borrelia burgd orferi sensu lato bakterija, kuri perduod am a erkėm is. Vabzd žiai, užsikr ėtę Borrelia burgdo rfe ri sensu lato,d au giau sia yra sutinka mi Šiaurės Amerikoje (Ixode s scapula ris arba I. pacifi cu s) ir vakarietiško se vidurio Europo s vietovė se (Ixod es ricinus). Europos erkės yra Borrelia Europo s rūšies vektoriu s: Borre lia burgdo rfe ri sensu stricto, B. afzelli, B. garinii (2), taip pat B. spielm a nii, B. bavarie nsis, kurie taip pat žinom i kaip patog eniški. B. valaisian a, B. lusitania e taip pat yra potenc iali patoge niška rūšis. Dėl didelio šių rūšių panašu m o, antikūn ai (IgG + IgM), nukreipti prieš šias skirting as Borrelia rūšis ir kryžminiu būdu reaguoja bent jau su Europos antige nų mišiniu % atvejų odos bėrima s, Erythe m a Migra ns, yra pirma sis klinikinis infekcijos požym is, pasirei škia ntis po 3-10 dienų vabzdž ių įkandim o vietoje. Po 1-3 mėne sių atsira nd a pirmie ji neurologinia i požymia i -galvo s skausm a s ar sunkū s sutrikim ai, o tokie sutrikim a i kaip mielita s (3), atsira nd a netgi, jei nėra Erythe m a Migrans. Vėliau pacie nta m s netgi po keleto metų nuo pirminė s infek cijo s, gali pasireik šti sunkios komplik a cijo s, pvz., sąnarių artrita s, taip pat mioka rdito ar akrod er mito, pertrau kiam ųjų priepu oliai. DUO LYME IgG + IgM-C H E CK -1 yra greitas kokybinis testas, skirtas Borrelia Europos rūšims nustatyti iš žmonių IgG ir IgM klasė s antikūnių aptiktų serum e, plazm oje arba kapilia riniam e kraujyje. Tačiau, testas neleidžia nustatyti ligos lygio teigiamų rezultatų atveju. Šis metod a s naudoja unikalų anti -žm o ga us imunoglob ulin ų dažų konjug atą ir labai išgrynintą natūra lų derinį (B.burg do rfe ri ir B. garinii) ir rekom bina ntinė s (B. burgdorfe ri) Borrelio antigen ų kietoje fazėje, siekia nt konkre čiai aptikti antikūnu s Borre lia. Testą sudar o testinė kasetė, kurioje yra dvi skirtin gos juostelės IgG arba IgM klasė s antikūna m s aptikti. Surinku s plazm ą, serum ą arba kapiliarinį kraują, į kiekvie n ą reakc ijo s įrenginio šulinė lį įlašina m kelis lašeliu s mėginio. Kai mėgin ys patenka per absor bcinį IgM lizdo prietaisą, anti -žm o ga us imuno globulinų dažų konju gata s prisiju ngia prie žmog au s IgM antikūnų, sudara nčių antikū nų ir antige n ų komple ksą. Tuo pačiu būdu, kai mėgin ys patenk a per IgG lipnią absorb cinį prieta isą, anti-ž m og au s imuno globulinų dažų konju gata s prisiju ngia prie žmog au s IgG antikūnų, sudara nčių antikū nų ir antige n ų komple ksą. Šie komple ksa i jungia si prie specifinių antige nų teigiam oje reakcijos zonoje ir gamin a rožinė s spalvo s juostelę. Jei nėra aptikti anti Borrelia antikū nų, juostelė teigiam oje reakc ijos zonoje neatsira nd a. Reakc ijos mišiny s tęsiasi per absorb entinį prieta isą iki reakcijos ir kontrolinė s zonos. Nesusiję s konju gata s jungia si prie kontrolin ės zonos reage ntų, gamin an čių rožin ės spalvos juostelę, kuri parodo ar reage ntai veikia tinkam ai. II. DUO LYME IgG + IgM-CHE CK- 1 RINKINI O SUDEDAM OSI OS DALYS Kiekvie na m e rinkinyje yra visos dalys, kurių reikia 10 ar 20 testų atlikti. DUO LYME IgG + IgM tetinių kasečių Plastikin ės pipetė s Buteliu ka s skiediklio, kuriam e yra kuriam e yra druskingo buferio, ploviklio ir natrio azido (NaN <0,1% ) 6 ml 11 ml Instru kc ija 1 1 III. SAUGOJI M AS IR STABILUM AS Visos DUO LYM E IgG + IgM- CH E C K -1 rinkinio suded am o sio s dalys turi būti laikom os nuo +4 C iki +30 C tempera tūroje uždaryta m e maišelyje. Neužšaldykit e testo sudedamūjų dalių. Nena ud okite testo pasibaig us galiojim o laikotar piui, nurod ytam pakuotė s etikėtėje. IV. ATSARG U M O PRIEMO NĖS Šis testas skirta s tik in vitro diagn oz a vimui ir profe sio nalia m naudojim ui. Prieš naudoda m i šį testą, atidžiai perskaitykite instrukci ją. Nena ud okite pasibaigu s galiojim o laikota rpiui, nurodyta m pakuotė s etiketėje. Nena ud okite testo, jei jo pakuotė yra pažeista. Visus ėminius traktuokite taip, tarsi juose būtų infekcijos sukėlėjų. Atlikę tyrimą, mėginius ir kitus komp one ntus šalinkite kaip biologine s atlieka s. Analiz u oda m i ėminius dėvė kite apsauginius drabužiu s,pa vy z džiui, laboratorinį chalatą, ir mūvė kite vienka rtine s pirštine s. Ėminių ir rinkinio reagentų naudojim o vietoje nevalgykite, negerkite ir nerūkykite. Imdam i ir tirdami ėminiu s, rankom is nelieskite akių ar nosies. V. ĖMINIO ĖMIMAS IR PARUOŠI M AS Serumas, plazma, kapiliarinis kraujas Ėminia i turi būti paimti standartinė s labora torijo s sąlygom is (aseptišk ai taip, kad būtų išvengta hemolizė s) Jeigu testas atlieka m a s per 48h po ėminių paėmim o, mėginiai turi būti laikomi šaldytuv e (nuo +2 C iki +8 C). Jeigu testas bus atlieka mas praėjus 48h, mėginia i turi būti užšald yti.

2 Prieš testavim ą užšaldtyti mėginiai turi būi visiška i atšald yti, kruop ščiai sumaišyti ir sušildyti iki kamb ario tempe ratū ro s. Venkie pakartotinio užšaldym o ir atšald ym o. Kapiliarinio kraujo meginiai turi būti panau doti iš karto po paėmimo (<4h). Esant debesuotu m ui, didelia m klamp um ui ar kietųjų dalelių buvim ui serum o mėgin yje, jis turėtų būti praskied žia m as su vienod o tūrio (V / V) praskie dim o buferiu (nėra pakuotėje, tačiau galima s užsaky m as). Kontrolin ėje dalyje (C) neišryškė ja kontrolinė linija. Pakartokite testą dar kartą. VIII. VEIKSMING UM O CHARAKT E RIS TIK O S 1. Laimas IgG a. Diagnostinis jautrumas ir specifiškumas Iš anksto įvertinti EIA metoda is (MiniV ida s Biomé rie ux, Liaiso n Diaso rin ir Enzy gno st Dade -Be hrin g) 142 serum o mėginia i iš skirtin gų Europos kilmės plokščių, buvo testuojam i su LYME - IgG. Rezultatai apibe n drinti 1 lentelė je. VI. TYRIMO PROCE DŪ RA 1. Leiskite visiem s reagenta m s sušilti iki kamba rio tempe ratūr os. 2. Išimkite testo prietaisą iš pakuotės atplėšd am i ją ties plėšim o linija. 3. Užra šykite ant testo kasetė s pacie nto vardą ir kontrolinį numerį. 4. Užpild ykite serum o lašintu vėlį mėginiu (seru m u arba plazm a ) ir laikyda mi jį vertik alia i, įlašinkite po vieną lašą (25 μl) į kiekvie ną šulinėlį. Užpild ykitę dvi kapilia rine s pipetes (kapilia riniu krauju) ir laikyd am i jas vertika liai iš vieno s pipetės įlašinkite į IgM testinį šulinėlį, o iš antros į IgG testinį šulinėlį. 5. Įlašinkite 5 arba 6 lašus skiediklio į kiekvien ą testinį šulinėlį. 6. Testo rezultatai bus aiškūs nuo 10 iki 15 minučių laiko tarpe. NEINTERP RET U OTI TESTO RESULT AT Ų PO 15 MINUČI Ų. LYME-IgG- CHECK- 1 Lente lė 1 Veiksmin gu m as yra suskaičiu otas iš lentelėje pateiktų duome nų: Jautrum a s: 61 / 75 x 100 = 81 % Specifišk um a s: 55 / 66 x 100 = 83 % Pamatiniai metodai (EIA) + - Iš viso Iš viso VII. TESTO REZULT AT Ų TIKRINIM AS Galimi rezultatų deriniai Bendra s sutarim as: (61+5 5) / (75+66) x 100 = 82 % b. Kryžminės reakcijos ir analitinis specifiškumas Serum o mėginiai, kurių sudėtyje yra didelio anti-trep on em a pallidum antikūnų, reum atoidinio fakto ria us, anti-e B V, anti-cm V ar antibrandu olinių antikū nų, buvo tiriami naudoja nt Lyme IgG-Ch e ck -1, siekia nt įvertinti galimus trukd žius. Gauti rezulta tai nurod yti 2 lentelė je. A. Neigiamas rezultatas Kontrolin ės linijos dalyje (C) išryškėja raudon a linija. Testinė je dalyje (R) neišryške ja linijos. B. Teigiamas rezultatas Kontrolin ės linijos linijos dalyje (C) išryškė ja raudo na linija ir testinėje dalyje išryškėja linija. C. Neigiamas rezultatas Teigia mi mėginiai Įgavo Iš viso mėginių teigia m us rezulta tus Sifilis 0 44 Reum atoidinis 2 30 faktoriu s anti-e B V antikūn ai 0 30 anti-c M V antikū nai 0 30 Anti-br an du oliniai 1 30 antikūna i Iš viso mėginių Lente lė 2

3 Rezulta tai rodo, kad LYME IgG-C H E CK -1 kryžm inė s reakcijos gali atsira sti, kai pacie ntų mėginiai turi didelį reumatoidinį faktorių arba anti-b ra nd uoliniu s antikūnu s. Tačia u bendra s analitinis specifiškum a s, gauta s nustata nt šiuos potenc ialia i trukdžiusius mėginius, vis tiek yra 98,2% (161/1 64 ). c. Trugdžiai nustatytų serum o mėginiuose (VIR O T E CH ) buvo padidinta s žmoga us hemoglobin o g / L kiekis). Šie mėginiai lygiagre čiai buvo ištirti be amplifika cijos naudoja nt LYM E IgG- CHECK - 1 testą. Gauti rezultatai pateikia m i atitink am ai 3, 4 ir 5 lentelė se. LYME IgG- CH E C K -1 Pavyzd žiai, titruoja mi Spiked with 2.5 N Titer in hemoglo bin g/l of hemoglo bin (> 9) (> 9) Lente lė 3 LYME IgG- CH E C K -1 Pavyzd žiai, titruoja mi Spiked with 0.3 N Titer in bilirubin g/l of bilirubin (> 9) (> 9) Lente lė 4 Pavyzdžiai, titruojami N Spiked with 10 g/l of (> 9) 91 Lente lė 5 Rezulta tai rodo, kad hemoglobin as, bilirub ina s ir triglice rida i neturi įtakos 2,5 g / l, 0,3 g / l ir 10 g / l konce ntrac ijo m s. 2. LYME IgM a. Diagnostinis jautrumas ir specifiškumas Iš anksto įvertinti EIA metoda is (MiniV ida s Biomé rie ux, Liaiso n Diaso rin ir Enzy gno st Dade -Be hrin g) 251 serum o mėginia i iš skirting ų Europo s kilmės plokščių, buvo testuoja mi su LYME -I gg. Rezultata i apibe nd rinti 6 lentelėje LYME - IgM - CHECK - 1 Lente lė (> 9) Veiksmin gu m as yra suskaičiu otas iš lentelėje pateiktų duome nų: Jautrum a s: 139 / 153 x 100 = 91 % Specifišk um a s: 82 / 98 x 100 = 84 % Pamatiniai metodai (EIA ) + - Iš viso Total Bendra s sutarim as: ( ) / ( ) x 100 = 88 % b. Diagnostinis jautrumas 3 ligos stadijose Vienoje Europos borrelioz ės etaloninėje labora torijoje buvo atlikta s tyrimas, kuriam e buvo naudojam i serum o mėginia i būdingi įvairie m s laimo ligos klinikinia ms lygiam s: 1 lygis rodo eryth m e a migra ns (EM), 2 lygis rodo ūminės neuro bo rrelioz ė s (NB) ir 3 lygis, apibūdin an čio lėtinį atrofinį akrode rm itą ir limo artritą. Gauti rezultatai skirtingie m s lygiam s yra pavaiz duoti 7 lentelėje.

4 Lygis Mėginių Teigiami Jautrumas skaičius LYME IgM- CHECK - 1 DIAZ O RI N O ELISA % EM NB d. Trugdžiai nustatytų serum o mėginiuose (DIA SO RI N, EURO IM M U N ) buvo padidintas žmoga us hemo globino (5 g / L kiekis) it bilirubino (0.3 g/l) arba trigleciridų (30 g/l). Šie mėginiai lygiagre čiai buvo ištirti be amplifika cijos naudoja nt LYM E IgG - CHECK - 1 testą. Gauti rezultatai pateikia m i atitink am ai 9, 10 ir 11 lentelė se. ACA Lente lė 7 Tarp tirtų mėginių keturi 1-ojo lygio mėginia i, 5 mėginiai antro lygio ir 7 mėginiai trečia lygio mėginia i turėjo labai silpnus IgM teigiam us rezultatu s (titrai buvo mažesni nei 1,5 x ribinė s vertė s). c. Kryžminės reakcijos ir analitinis specifiškumas Serum o mėginiai, kurių sudėtyje yra didelio anti-trep on em a pallidum antikūnų, reum atoidinio fakto ria us, anti-e B V, anti-cm V ar antibrandu olinių antikū nų, buvo tiriami naudoja nt Lyme IgG-Ch e ck -1, siekia nt įvertinti galimus trukd ži us. Gauti rezulta tai nurod yti 8 lentelė je. Teigia mi mėginiai Įgavo Iš viso mėginių teigia m us rezulta tus Sifilis 6 53 Reum atoidinis 1 30 faktoriu s anti-e B V antikūn ai 3 30 anti-c M V antikū nai 9 30 Anti-br an du oliniai 4 30 antikūna i Iš viso mėginių Lente lė 8 Rezulta tai rodo, kad LYME IgG-C H E CK -1 kryžm inė s reakcijos gali atsira sti, kai pacie ntų mėginiai turi didelį reumatoidinį faktorių arba anti-b ra nd uoliniu s antikūnu s. Tačia u bendra s analitinis specifiškum a s, gauta s nustata nt šiuos potenc ialia i trukdžiusius mėginius, vis tiek yra 86.7% (150/1 73 ). Pavyzdžiai, titruojami Spiked with 5 g/l of N Titer in hemoglo bin hemoglo bin (> 0.8) (> 0.8) Lente lė 9 Pavyzdžiai, titruojami Spiked with 0.3 g/l of N Titer in bilirubin bilirubin (> 0.8) (> 0.8) Lente lė 10

5 Pavyzdžiai, titruojami N Titer in trigky ce ride s (> 0.8) 39 Lente lė 11 Rezulta tai rodo, kad hemoglobin as, bilirubina s ir triglice rida i neturi įtakos 5g / l, 0,3 g / l ir 30 g / l konce ntr ac ijo m s. e. Užšaldymo / atšaldymo ciklas Neigia m i, silpni teigiam i ir stiprūs teigia mi anti -bo rrelio IgM serum o mėginiai, turintys 3 užšald ym o / atšildy m o ciklus, nepar odė rezulta tų. IX. 5.6 (> 0.8) Spiked with 30 g/l of APRIBOJI M AI 1. Borelioz ė s diagno zė negali būti nustatyta ar pašalinta tik remia ntis DUO LYME IgG + IgM-C H E CK -1 rezultata is. 2. Imuninis atsaka s gali būti pavėlu ota s infek uotiem s pacie nta m s. Per pirminę ligos fazę (I) (6), kuria m būding as Eryth e m a migrans vystym a sis, IgM antikūn ai gali būti aptikti praėjus 2-6 savaitė m s po erkių įkandim o ir tik 40-60% atvejų. Antra m etapui (II) būding as ūminės neuro bo rrelioz ė s vystym ąsis, antikūn ai (IgM ir IgG) nustatomi 70-90% atvejų. Todėl po 4-6 savaič ių rekom e ndu ojam a atlikti dar vieną testą, kad būtų patikrinta s antikūn ų kiekis, jei pirmą kartą buvo gauta s neigiam a s rezultata s. Trečioje ligos stadijoje (III), kuriam būdin ga s lėtinis atrofinis akrode rm ita s ir laimo artrita s, antikūna i (IgM ir IgG) papra stai aptink a mi. 3. Labai anksty va infekc ijo s stadija arba pacie ntai, anksč iau gydyti antibiotikais, gali lemti klaidingu s neigiam u s rezultatu s dėl mažos anti-b orre lia IgM antikūnų konce ntrac ijo s, kurios DUO LYM E IgG + IGM-C H E CK -1 negali nustatyti. X I. 4. Kai kuriais atvejais teigiam u s rezultatu s galima gauti dėl antikūnų (IgG ar IgM) išlikim o daugiau nei 10 metų po gydym o (7). Dėl paste bim ų kryžminių reakcijų (IgG antikū nų lentelė 2 ir IgM 9 lentelė. "Kryž m inė s reakcijos ir analitinis specifišk um a s" dalyje), pvz., Anti-C M V a ntik ūn ai IgM, svarbu būti atsargie m s galutiniu ose DUO LYME IgG + IgM-C H E CK -1 bandym o rezultatų interp reta vim uo se. 5. Antikū nų lygis yra kintam as, prikla usom a i nuo testuotų pacie ntų. Visose populiac ijo se paplitim a s beveik 3-5%, o eksponu otie m s asmenim s (miški nink a m s, turista m s) antikūn us galima nustatyti 25%- 30 % atvejų (5). 6. Kalba nt apie bet kurią diagnostinę proced ūrą, gydytojas turėtų įvertinti duome nis, gautus naudoja nt testą, atsižvelg da m as į kitą klinikin ę inform aciją, nes pacienta m s, sergantie m s borelioz e, gali pasireik šti simpto m ai, panašū s į sifilį (4). 7. Greita sis DUO LYME IgG + IgM-C H E CK - 1 tyrima s turėtų būti atlieka m a s atsižv elgia nt į visus kriterijus, tokius kaip istorinė epide miolo ginė situacija regione, paciento simpto m ai, taip pat bandym ų apribojim ai. X. BIBLIOGRAFIJ A 1. Marq ue s, A.R., Hornu ng, R.L., Dally, L. and Philipp, M.T Detection of Immun e Complex es is not indepe nd ent of detection of antibodie s in Lyme disease patients and does not confir m active infection with Borrelia burgd orf eri. Clinical and Diagno stics Labor atory Immu nolog y, 12/9: Lyme Disease and Related Tick-Bo rne infection s Southw e ste rn Verm ont Health Care. 3. Nade lm an, R.B. and Worm se r, G.P Lyme borreliosis. Lanc et 352 : Dura y, P.H Clinic al pathologic correlation s of Lyme disease. Review s of Infectiou s Disea se s. 11/6 : S1487 -S Bertholo m, C Place et intérêt des métho de s du diagno stic biologiq ue au cours de la borréliose de Lyme. Option Bio. 387 : La borréliose de Lyme. Rapport du groupe de travail. HCSP. 28 Mars Kalish, R.A., Granquist, G., Shea, J., Rutha ze r, B. et al Persiste nc e of immunoglo bulin M or immunoglo bulin G antibo dy respo nse s to Borrelia burgdo rfe ri years after active Lyme disease. Clin Infect Dis :